黑曲霉基因组DNA

参考用途：研究；分析检测。2015版中国药典质控菌株，《GB 4789.15-2010霉菌和酵母计数》阳性对照菌株。产孢子。2020版药典—“通则1100 生物检查法”供试菌株 药典用菌,培养基“灵敏度检查”供试菌株,“方法适用性试验”供试菌株 ,“计数培养基适用性检查和供试品计数方法适用性试验”供试菌株,微生物计数“培养基适用性检查和方法适用性试验”供试菌株,“培养基适用性检查、方法适用性试验、抑菌效力测定试验”供试菌株 GB 4789.15-2016霉菌和酵母计数

培养条件：25-28℃，严格好氧,5-7d.

培养基：马铃薯浸粉：10.0g，葡萄糖：20.0g，KH2PO4：3.0g，MgSO4·7H2O：1.5g，硫胺素：0.008g，琼脂：15.0g，pH：6.0±0.2（25℃）

培养方法：使用前请先在去蛋白液RD和漂洗液PW中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上标签； 1.取新鲜菌丝加入液氮充分研磨； 2.向研磨好的粉末中迅速加入400μL缓冲液GPS和10μL RNase A（10mg/mL），迅速涡旋混匀后，将离心管放在65℃水浴15min，水浴过程中颠倒离心管以混合样品数次。注意：若裂解后溶液粘稠，可以适量加大GPS使用量，同时在步骤3中增加缓冲液GPA的使用量，最终GPS和GPA的体积比为4：1； 3.加入100μL缓冲液GPA，涡旋振荡1min，12,000rpm(13,400×g)离心5min，转移上清至过滤柱CS中（过滤柱CS放在收集管中），然后12,000rpm(13,400×g)离心1min，转移滤液至新的离心管中。注意：若裂解后溶液粘稠，加入缓冲液GPA涡旋混匀后将离心管置于冰上静置5min，然后再离心； 4.加入等体积的无水乙醇，充分混匀，此时可能会出现絮状沉淀； 5.将上一步所得溶液和絮状沉淀都转移到RNase-Free吸附柱CR2中（吸附柱CR2放在收集管中），12,000rpm(13,400×g)离心1min，倒掉废液，RNase-Free吸附柱CR2放入收集管中； 6.向RNase-Free吸附柱CR2中加入550μL去蛋白液RD（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000rpm(13,400×g)离心1min，倒掉废液，将RNase-Free吸附柱CR2放入收集管中； 7.向RNase-Free吸附柱CR2中加入700μL漂洗液PW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000rpm(13,400×g)离心1min，倒掉废液，将RNase-Free吸附柱CR2放入收集管中； 8.重复步骤7； 9.将RNase-Free吸附柱CR2放回收集管中，12,000rpm(13,400×g)离心2min，弃收集管，然后将RNase-Free吸附柱CR2转移到新的离心管中，室温晾干5-10min。注意：乙醇残留会抑制后续的酶反应，所以晾干时要确保乙醇挥发干净。但也不要干燥太长时间，以免难以洗脱DNA； 10.在RNase-Free吸附柱CR2中加入50-100μL洗脱缓冲液TB，室温放置3-5min，12,000rpm(13,400×g)离心2min，将溶液收集到离心管中；