pGL4.29[luc2P-CRE-Hygro]

参考用途：pGL4.29[luc2P/CRE/Hygro] 载体 （a–f） 包含一个 cAMP 反应元件 （CRE），可驱动荧光素酶报告基因 luc2P （Photinus pyralis） 的转录。luc2P 是一种合成来源的荧光素酶序列，具有人源密码子优化功能，专为高表达和减少异常转录而设计。luc2P 基因包含 hPEST，一种蛋白质不稳定序列。诱导时，luc2P 编码的蛋白质比 luc2 基因编码的蛋白质反应更快。载体骨架包含一个氨苄青霉素抗性基因，允许在大肠杆菌中进行选择，以及一个用于潮霉素抗性的哺乳动物选择标记物。

培养条件：LB +氨苄青霉素，37℃（克隆菌株DH5α，6084bp）

培养基：酵母膏：5.0g，蛋白胨：10.0g，NaCl：10.0g，pH：7.0(25℃)

培养方法：1.溶解： 收到质粒干粉后，请加入 20μl 无菌水至管底，溶解质粒，室温静置 1min； 2.混合（吸附质粒）： 200μl 感受态细胞 + 质粒 DNA 5~10µl 混匀，冰上放置 30min； 3.热激导入： 42℃静置 90s； 4.收缩膜孔： 冰浴 2min； 5.修复培养： 毎管加 800µl LB 液体培养基，37 ℃培养 1h 150 r/min； 6.筛选培养： 将适当体积（100 µl）的复苏细胞，涂布在相应抗性的 LB 平板上，正置平皿 30min（琼脂面务必干燥后）， 倒置培养 12-16h，出现菌落。 7.提取： 挑取单克隆菌落至相应抗性 LB 液体培养基中，震荡培养 12-16h，根据试验需要提取质粒。