pBlueScript II SK(+)

参考用途：pBluescript II KS(+)是一种大肠杆菌质粒，源自噬菌体，是一种广泛应用于分子克隆的载体。该载体被广泛应用于克隆和测序实验，包括DNA测序、嵌套缺失构建、体外RNA转录、定点突变和基因定位等研究。pBluescript II KS(+)具有21个独特的限制性内切酶识别位点，使得插入和操作DNA变得非常灵活。其多克隆位点(MCS)两侧分别包含T7和T3 RNA聚合酶启动子序列，主要用于支持RNA的体外合成

培养条件：LB+氨苄青霉素，37℃（克隆菌株DH5α，2961bp）

培养基：酵母膏：5.0g，蛋白胨：10.0g，NaCl：10.0g，pH：7.0(25℃)

培养方法：1.溶解： 收到质粒干粉后，请加入 20μl 无菌水至管底，溶解质粒，室温静置 1min； 2.混合（吸附质粒）： 200μl 感受态细胞 + 质粒 DNA 5~10µl 混匀，冰上放置 30min； 3.热激导入： 42℃静置 90s； 4.收缩膜孔： 冰浴 2min； 5.修复培养： 毎管加 800µl LB 液体培养基，37 ℃培养 1h 150 r/min； 6.筛选培养： 将适当体积（100 µl）的复苏细胞，涂布在相应抗性的 LB 平板上，正置平皿 30min（琼脂面务必干燥后）， 倒置培养 12-16h，出现菌落。 7.提取： 挑取单克隆菌落至相应抗性 LB 液体培养基中，震荡培养 12-16h，根据试验需要提取质粒。