pMDLg-pRRE

参考用途：pMDLg/pRRE是第三代慢病毒包装辅助质粒，载有病毒gag和pol基因。 pMDLg/pRRE与pRSV-Rev（JY03037）和pMD2.G（JY03027）构成第三代慢病毒包装系统，用于包装第三代慢病毒载体质粒，这4个质粒组成四质粒系统（即第三代慢病毒系统）。 将这4个质粒共同转染293T等细胞以包装重组慢病毒，用此慢病毒感染目的细胞，即可实现基因敲除、敲降和过表达等。

培养条件：LB +氨苄青霉素，37℃（克隆菌株Stbl3,8890bp）

培养基：LB+50mcg/ml氨苄青霉素：酵母膏 5.0g，蛋白胨 10.0g，NaCl 10.0g，蒸馏水 1.0L，pH 7.0。121℃，15min灭菌。灭菌结束后，培养基冷却至40-50℃时加入抗生素，浓度50mcg/ml。

培养方法：1.溶解： 收到质粒干粉后，请加入 20μl 无菌水至管底，溶解质粒，室温静置 1min； 2.混合（吸附质粒）： 200μl 感受态细胞 + 质粒 DNA 5~10μl 混匀，冰上放置 30min； 3.热激导入： 42℃静置 90s； 4.收缩膜孔： 冰浴 2min； 5.修复培养： 毎管加 800μl LB 液体培养基，37 ℃培养 1h 150 r/min； 6.筛选培养： 将适当体积（100 μl）的复苏细胞，涂布在相应抗性的 LB 平板上，正置平皿 30min（琼脂面务必干燥后）， 倒置培养 12-16h，出现菌落。 7.提取： 挑取单克隆菌落至相应抗性 LB 液体培养基中，震荡培养 12-16h，根据试验需要提取质粒。